ABSTRACT
Brucellosis is a zoonose produced by bacterial species from the Brucella genus. Its isolation and identification in food using classical microbiological techniques is not practical due to its slow growth rate. Therefore, it is necessary to establish fast and specific methods for the detection of the bacteria in food. The goal of this work was the production and characterization of monospecific polyclonal antibodies in chicken (IgY) against synthetic peptides from Brucella abortus OMP25 and BP26 proteins, suitable for an antigen-capture assay. Conformational as well as antigenic predictions were performed using the ANTHEPROT package. Chemical synthesis was carried out by the multiple manual synthesis using the t-boc strategy. The peptides were used as antigens for the preparation of polyclonal antibodies in chicken. Experimental animals produced specific antibodies against the OMP25 and BP26 peptides constructs determined by ELISA and MABA assays showing correspondence between the predictive study and the immunogenicity obtained in chicken. The IgY proved to be able to recognize B. abortus by MABA assays. The binding activity and specificity of antibodies was determined by Western blot with cell extract from B. abortus. In this study, we demonstrated that OMP25 and BP26 peptides constructs are good candidates for production of specific IgY antipeptide antibodies capable of recognizing proteins from sonicated B. abortus strain S19, indicating the potential usefulness of the IgY antibody for development of immunoassays for detection of Brucella abortus.
La brucelosis es una zoonosis producida por especies del género Brucella. El aislamiento e identificación de la bacteria en alimentos usando las técnicas clásicas de microbiología no es práctico debido a su lenta tasa de crecimiento. Por lo tanto, es necesario establecer métodos rápidos para la detección de la bacteria en alimentos. En el presente trabajo se desarrollaron y caracterizaron anticuerpos policlonales monoespecíficos en gallinas (IgY) contra péptidos sintéticos de las proteínas OMP25 y BP26 de Brucella abortus, que puedan ser utilizados en un ensayo de captura. Para ello, se realizaron estudios conformacionales y de predicción de epítopes en la selección de los péptidos, los cuales se utilizaron como antígenos para la producción de las IgY. Los animales desarrollaron anticuerpos específicos contra los péptidos, mostrando correspondencia entre los estudios predictivos y la inmunogenicidad obtenida. Las IgY reconocieron a B. abortus en un ensayo de MABA y la actividad de unión y especificidad fue determinada por western blot con extracto celular de B. abortus. En este estudio, demostramos que los péptidos de las proteínas OMP25 y BP26 de B. abortus son buenos candidatos para la producción de anticuerpos IgY especificos capaces de reconocer proteínas de extracto de B. abortus cepa S19, indicando el potencial uso de anticuerpos IgY para el desarrollo de inmunoensayos para la detección de Brucella abortus.
ABSTRACT
Antecedentes: las microalgas son una fuente de compuestos fisiológicamente activos que pueden considerarse como ingredientes funcionales. El género Arthrospira (Spirulina), pertenece al grupo de algas verde-azules, cuyas especies más importantes son Arthrospira máxima y Arthrospira platensis. Estas microalgas tienen una composición bioquímica adecuada para ser utilizada como complemento alimenticio, con el fin de desarrollar nuevos productos. Objetivo: evaluar el efecto de la suplementación de sémola de trigo con concentraciones de 5, 10 y 20% de Arthrospira platensis en la calidad y aceptabilidad de los espaguetis, y evaluar una evaluación física y química de la pasta seleccionada. Métodos: Se prepararon, cocinaron y evaluaron controles (pasta de sémola al 100%) y pastas con diferentes concentraciones de sémola y microalgas en parámetros como tiempo de cocción, peso, sólidos, etc. Proteínas solubles, parámetros de firmeza instrumental y evaluación de las propiedades de palatabilidad. La pasta más aceptada se analizó para determinar la composición próxima, la fibra dietética, los minerales, la biodisponibilidad de los minerales, el cálculo de aminoácidos, el índice glucémico y los compuestos con potencial antioxidante. Los resultados de la composición proximal y la fibra se compararon con los obtenidos en la pasta de control. Resultados: Comparando las pastas experimentales con la de control, se observó un efecto estadísticamente significativo en el aumento del tiempo de cocción, el peso, la pérdida de sólidos y proteínas y una reducción de la firmeza. La prueba de aceptabilidad entre las pastas suplementadas con mezclas de 5 y 10% de biomasa de microalgas incorporadas no varió, por lo que se seleccionó la pasta de biomasa al 10% para evaluar los parámetros de composición. Los resultados mostraron que esta pasta tenía un mayor contenido de proteínas, fibra dietética y ceniza en comparación con la pasta de control, con una puntuación de aminoácidos de 0,42 (deficiente en lisina), índice glucémico intermedio y la presencia de compuestos con actividad antioxidante. Conclusiones: El desarrollo de pasta nutricional con la adición de A. platensis hasta un 10% como ingrediente funcional en una mezcla de sémola genera un producto de calidad nutricional adecuada, presencia de sustancias con capacidad antioxidante reconocida y aceptada por los consumidores.